컬럼 평형화는 어느 정도가 적당한가요?

시간보다 컬럼 부피(column volume) 기준으로 생각하시는 게 정확합니다.

4.6 x 150mm 컬럼이면 대략 1.5mL 정도가 한 컬럼 부피예요. 아이소크라틱이면 10배, 그라디언트나 이온쌍 시약을 쓰면 20배 이상을 흘려주는 게 일반적입니다. 1mL/min이면 15분에서 30분 정도가 되는 셈이죠.

컬럼 내경이 작아지면 부피도 확 줄어서, 2.1mm 컬럼은 훨씬 짧게 걸립니다. 선배들 말씀이 달랐던 것도 쓰던 컬럼 규격이 달라서일 수 있어요.

확실한 건 베이스라인으로 판단하는 겁니다. 흐름이 안정되고 베이스라인 기울기가 평평해지면 준비된 거예요. 표준품 한 번 주입해서 머무름 시간이 재현되는지 보는 것도 좋은 확인 방법입니다.