첫 번째 피크만 갈라져서 나와요

컬럼이 아니라 시료 용매가 이동상보다 강해서 생기는 현상일 가능성이 높습니다.

시료를 100% 아세토니트릴 같은 강한 용매에 녹여서 주입하면, 그 용매 덩어리가 컬럼 앞부분에서 성분을 붙잡지 못하고 밀고 들어갑니다. 그러면 초기 용출 성분일수록 밴드가 퍼지거나 갈라져요. 뒤에 나오는 성분은 그동안 이동상에 희석되면서 정상으로 돌아옵니다.

새 컬럼으로 바꿔도 같았다는 게 이 해석을 뒷받침합니다.

해결은 간단합니다. 시료를 초기 이동상 조성에 가깝게 희석해서 주입하거나, 주입량을 줄이면 대부분 사라집니다. 전처리상 강한 용매가 불가피하다면 주입량을 5uL 이하로 낮춰보세요.